Preguntas frecuentes y consideraciones sobre cromatografía de gases

Gas Chromatography Principles

1. ¿Cuáles son las características de la cromatografía de gases?

R: La cromatografía de gases es un tipo de cromatografía que utiliza gas como fase móvil. Sus ventajas para la separación y el análisis son las siguientes: 1. Alta sensibilidad: puede detectar sustancias en cantidades tan pequeñas como 10⁻¹³ gramos, y es adecuada para analizar impurezas traza en gases ultrapuros, monómeros de alto peso molecular y venenos traza en el aire. 2. Alta selectividad: puede separar eficazmente isómeros e isótopos con propiedades muy similares. 3. Alta eficiencia: puede separar muestras complejas en componentes individuales. 4. Alta velocidad: un análisis general puede completarse en pocos minutos, facilitando el control y la guía de la producción. 5. Amplio rango de aplicaciones: puede analizar tanto gases y líquidos de bajo contenido como de alto contenido, independientemente del contenido de los componentes. 6. Se requiere un volumen de muestra pequeño: generalmente se usan unos mililitros para muestras de gas, y unos microlitros o decenas de microlitros para muestras líquidas. 7. El equipo y la operación son relativamente simples, y el instrumento es económico.

2. ¿Cuál es el principio de separación de la cromatografía de gases? Respuesta: La cromatografía de gases es un método de separación física. Aprovecha la ligera diferencia en el coeficiente de distribución (solubilidad) de los componentes de la sustancia analizada entre dos fases diferentes. Cuando las dos fases están en movimiento relativo, estas sustancias se distribuyen repetidamente entre las dos fases, haciendo que la ligera diferencia original de propiedades produzca un gran efecto, separando así los diferentes componentes.

3. ¿Qué es la cromatografía de gases? ¿Cuántas categorías tiene? Respuesta: Todas las técnicas de cromatografía que utilizan gas como fase móvil se denominan generalmente cromatografía de gases. Generalmente, pueden clasificarse según los siguientes aspectos: 1. Clasificación por el estado de agregación de la fase estacionaria: (1) Cromatografía gas-sólido: la fase estacionaria es un adsorbente sólido. (2) Cromatografía gas-líquido: la fase estacionaria es un líquido recubierto sobre la superficie del soporte.

2. Clasificación por principios físicos y químicos del proceso: (1) Cromatografía de adsorción: cromatografía que utiliza las diferencias en las propiedades de adsorción física de diferentes componentes sobre una superficie de adsorción sólida para lograr la separación. (2) Cromatografía de reparto: cromatografía que utiliza los diferentes coeficientes de distribución de diferentes componentes entre dos fases para lograr la separación. (3) Otras: cromatografía de intercambio iónico basada en el principio del intercambio iónico; electrocromatografía basada en el efecto electrocinético de los coloides; termocromatografía basada en el aprovechamiento de los cambios de temperatura, etc.

3. Clasificación por tipo de fase estacionaria: (1) Cromatografía en columna: la fase estacionaria está contenida en la columna cromatográfica. Las columnas empaquetadas, las columnas huecas y las columnas capilares pertenecen todas a esta categoría. (2) Cromatografía en papel: se utiliza papel de filtro como soporte. (3) Cromatografía en película fina: la fase estacionaria es una película fina prensada a partir de polvo.

4. Clasificación según el principio del proceso cinético: puede dividirse en tres tipos: método de elución, método de desplazamiento y método frontal.

4. ¿En qué consiste el proceso de un dispositivo de análisis de cromatografía de gases sencillo? Respuesta: El proceso de un dispositivo de análisis de cromatografía de gases sencillo consiste básicamente en cuatro partes: 1. Fuente de gas 2. Dispositivo de inyección de muestra 3. Columna cromatográfica 4. Identificador y registrador

5. ¿Cuáles son los términos comunes y conceptos básicos de la cromatografía de gases? Respuesta: 1. Fase, fase estacionaria y fase móvil: una porción homogénea de un sistema se denomina fase. En las separaciones cromatográficas, la fase estacionaria se denomina fase estacionaria; el fluido que se mueve a través o a lo largo de la fase estacionaria se llama fase móvil. 2. Pico cromatográfico: las curvas que aparecen en el registrador después de que una sustancia pasa por la columna cromatográfica y entra en el detector se denominan picos cromatográficos. 3. Línea base: bajo condiciones de operación cromatográfica, cuando ningún analito pasa por el detector, la curva del ruido del detector a lo largo del tiempo se denomina línea base. 4. Altura de pico y anchura a media altura: la distancia entre la intersección de una línea trazada desde el máximo de concentración del pico hasta la línea base se denomina altura de pico, expresada generalmente como h. La anchura a la mitad de la altura del pico se denomina anchura a media altura, expresada generalmente como x1/2. 5. Área de pico: el área formada por la curva de elución (pico cromatográfico) y la línea base se denomina área de pico, expresada como A. 6. Tiempo muerto, tiempo de retención y tiempo de retención corregido: el tiempo desde la inyección hasta el máximo del pico del gas inerte se denomina tiempo muerto, expresado como td. El tiempo necesario desde la inyección hasta la aparición del valor más alto del pico cromatográfico se denomina tiempo de retención, representado como tr. La diferencia entre el tiempo de retención y el tiempo muerto se denomina tiempo de retención corregido, representado como Vd. 7. Volumen muerto, volumen de retención y volumen de retención corregido: el producto del tiempo muerto y el caudal medio del gas portador se denomina volumen muerto, representado como Vd; el caudal medio del gas portador se representa como Fc, Vd=td×Fc. El producto del tiempo de retención y el caudal medio del gas portador se denomina volumen de retención, representado como Vr, Vr=tr×Fc. 8. Factor de retención y retención ... [truncado]

6. ¿Cuáles son los criterios generales para seleccionar un gas portador? ¿Cuáles son los gases portador habituales en cromatografía de gases? Respuesta: Los gases utilizados como gases portadores en cromatografía de gases (GC) deben cumplir varios criterios esenciales, entre ellos buena estabilidad química, alta pureza, bajo coste, fácil disponibilidad y compatibilidad con el detector empleado. Los gases portadores habituales son hidrógeno, nitrógeno, argón, helio y dióxido de carbono. Cada gas tiene sus ventajas y limitaciones, lo que influye en la elección según los requisitos analíticos específicos y la naturaleza de las muestras analizadas.

Recientemente, ha habido una tendencia significativa a sustituir el helio por hidrógeno debido al aumento de los costes y los problemas de suministro asociados al helio. El hidrógeno ofrece varias ventajas, entre ellas una mayor sensibilidad y tiempos de análisis más rápidos. Para facilitar esta transición, fabricantes como PEAK, LNI y Hovogen ofrecen soluciones de generación de hidrógeno in situ, permitiendo a los laboratorios producir gas hidrógeno según sus necesidades. Esto no solo aborda la preocupación por los costes, sino que también garantiza un suministro continuo de hidrógeno de alta pureza para aplicaciones de cromatografía de gases.

7. ¿Por qué es necesario purificar el gas portador? ¿Cómo debe purificarse? Respuesta: La purificación es la eliminación de impurezas como materia orgánica, oxígeno traza y humedad del gas portador para mejorar su pureza. El uso de gases impuros como gas portador puede provocar el fallo de la columna, variabilidad de la muestra, aumento del ruido de la línea base en cromatografía de llama de hidrógeno y mala linealidad en cromatografía de conductividad térmica. Por tanto, el gas portador debe purificarse. Generalmente se utilizan tratamientos químicos, como cobre activado, para eliminar el oxígeno; tamices moleculares y carbón activado para eliminar las impurezas orgánicas; y gel de sílice y tamices moleculares para eliminar la humedad.

8. ¿Cuáles son los métodos de inyección de muestra? Respuesta: La separación cromatográfica requiere que una determinada cantidad de muestra se inyecte en forma de «tapón» en el menor tiempo posible. Los métodos de inyección pueden dividirse en: 1. Muestra de gas: existen generalmente cuatro métodos de inyección: (1) inyección con jeringa (2) inyección con tubo volumétrico (3) inyección de volumen fijo (4) inyección automática de gas. La inyección con jeringa y la inyección automática de gas son las más utilizadas. Las ventajas de la inyección con jeringa son la flexibilidad y la sencillez, pero la repetibilidad del volumen de inyección es pobre. La inyección automática de gas utiliza una válvula cuantitativa para la inyección, que tiene buena repetibilidad y puede operarse automáticamente. 2. Muestra líquida: generalmente se utiliza una microjeringa para la inyección, que es sencilla y rápida. También puede utilizarse inyección automática cuantitativa, que tiene buena repetibilidad. 3. Muestra sólida: la muestra se disuelve normalmente en un disolvente y luego se inyecta mediante el mismo método que la inyección líquida. También se utilizan inyectores de sólidos para la inyección.

9. Describa brevemente los efectos de la longitud de la columna, el diámetro interior de la columna, la temperatura de la columna, el caudal del gas portador, la fase estacionaria, la inyección y otras condiciones de operación sobre la separación en el análisis de cromatografía de gases.

R: Las condiciones de operación influyen significativamente en las separaciones cromatográficas. 1. Longitud y diámetro interior de la columna: en general, las columnas más largas mejoran el rendimiento de separación, mientras que las columnas más cortas permiten una elución más rápida. Un diámetro interior más pequeño produce mejor separación, mientras que un diámetro interior más grande aumenta el rendimiento. Sin embargo, un diámetro interior excesivamente grande puede provocar una distribución desigual del soporte dentro de la columna. Las columnas analíticas suelen tener un diámetro interior de 3–6 mm y una longitud de 1–4 metros.

2. Temperatura de la columna: es una variable operativa crítica, que impacta directamente la eficiencia de separación y la velocidad de análisis. La selección de la temperatura de la columna se basa en el rango de punto de ebullición de la mezcla, la proporción de la fase estacionaria y la sensibilidad del detector. Aumentar la temperatura de la columna acorta el tiempo de análisis; disminuir la temperatura aumenta la selectividad de la columna, facilitando la separación de componentes, mejorando la estabilidad de la columna y prolongando su vida útil. Una temperatura de columna igual o varias decenas de grados por encima del punto de ebullición medio de la muestra suele ser adecuada. Se utilizan temperaturas de columna bajas para muestras volátiles, y temperaturas altas para muestras menos volátiles.

3. Caudal del gas portador: el caudal del gas portador es uno de los factores más importantes para determinar las separaciones cromatográficas. En general, caudales más altos producen picos cromatográficos más estrechos, mientras que caudales más bajos producen picos más anchos. Sin embargo, tanto un caudal demasiado alto como demasiado bajo pueden afectar negativamente a las separaciones. El caudal debe ser estable, siendo un rango típico de 10–100 ml/min el valor ideal.

4. Fase estacionaria: la fase estacionaria está compuesta por un adsorbente sólido o un soporte recubierto con un líquido estacionario. (1) Tamaño de partícula del adsorbente sólido o soporte: generalmente se utilizan 40–60 mesh, 60–80 mesh y 80–100 mesh. Al utilizar columnas de la misma longitud, las partículas finas tienen mejor eficiencia de separación que las gruesas. (2) Contenido de líquido estacionario: el contenido de líquido estacionario tiene un impacto significativo en la eficiencia de separación. La proporción en peso del líquido estacionario respecto al soporte es generalmente del 15–25 %. Una proporción demasiado alta perjudicará la separación, mientras que una proporción demasiado baja provocará cola de los picos cromatográficos.

5. Inyección: en general, una inyección más rápida, volúmenes de inyección más pequeños y temperaturas de inyección más altas producen mejores resultados de separación. Para muestras líquidas, la velocidad de inyección debe ser alta, y la temperatura de vaporización debe estar por encima del punto de ebullición de los componentes de alto punto de ebullición de la muestra. Esto garantiza que los picos cromatográficos no se ensanchen, maximizando así la eficiencia de la columna. Dentro de un límite determinado de volumen de inyección, la anchura total a media altura (FWHM) del pico cromatográfico permanece constante. Un volumen de inyección excesivo sobrecargará la columna. En general, cuadruplicar la longitud de la columna duplica el volumen de muestra permisible. Para el análisis de rutina, el volumen de inyección para líquidos es de 1–20 μL; para gases, de 0,1–5 ml.

10. ¿Según qué principios deben seleccionarse los materiales de los tubos de la columna cromatográfica? ¿Qué materiales se utilizan habitualmente para los tubos de columna? Respuesta: El material de los tubos de la columna cromatográfica debe seleccionarse según los siguientes requisitos: 1. No debe reaccionar químicamente con la fase estacionaria, la muestra o el gas portador. 2. Debe ser fácil de procesar y moldear. 3. La pared interior del tubo debe ser lisa, y la sección transversal debe ser uniformemente redonda. Los tubos de la columna cromatográfica suelen ser en forma de U o espiral, y están fabricados principalmente de cobre, acero inoxidable, vidrio y otros materiales.

11. ¿Cómo debe tratarse una columna cromatográfica nueva (de cobre o acero inoxidable) antes de su uso? Respuesta: Una columna nueva debe lavarse primero con un ácido o álcali diluido (ácido clorhídrico o hidróxido de sodio 1:1) para eliminar el aceite y otras suciedades. Luego enjuagar con agua del grifo, después enjuagar con agua destilada hasta que quede neutra. Finalmente, soplar con aire limpio y secar antes de usar.

12. ¿Qué es un soporte? ¿Cuáles son los requisitos de un soporte? R: Un soporte es un sólido poroso e inerte químicamente que se utiliza para soportar la fase estacionaria en cromatografía de gases. Los requisitos de un soporte son los siguientes: 1. Una gran superficie, generalmente entre 0,5 y 2 m²/g; 2. Inercia química y estabilidad térmica; 3. Suficiente resistencia mecánica para evitar la rotura durante el recubrimiento y el llenado; 4. Una estructura de poros adecuada para facilitar la rápida transferencia de masa entre las dos fases; 5. La capacidad de formar partículas esféricas uniformes para facilitar la penetración de la fase gaseosa y el llenado uniforme; 6. Excelente mojabilidad para facilitar la distribución uniforme de la fase estacionaria. Es difícil encontrar un soporte que cumpla plenamente estos requisitos, y en la práctica solo pueden encontrarse soportes con un rendimiento relativamente bueno.

13. ¿Cuántos tipos de soportes existen? ¿Cuáles son sus características? Respuesta: Suelen dividirse en dos categorías: tierra de diatomeas y no diatomeas, y cada categoría tiene varias subcategorías. 1. Tipos de tierra de diatomeas: (1) Blanco: superficie pequeña, suelto, quebradizo, baja capacidad de adsorción; tras un tratamiento adecuado, puede analizar componentes altamente polares; (2) Rojo: tiene una gran superficie y buena resistencia mecánica, pero alta capacidad de adsorción. 2. Tipos no diatomeos: (1) Soportes de flúor: buena inerticidad superficial, pueden usarse para analizar sustancias altamente polares y corrosivas, pero son difíciles de empaquetar en la columna, y la eficiencia de la columna es baja. (2) Microesferas de vidrio: superficie pequeña; su uso como soporte puede reducir considerablemente la temperatura de la columna, y la separación es completa y rápida. Sin embargo, son difíciles de recubrir y la eficiencia de la columna es baja. (3) Perlas poliméricas porosas: alta resistencia mecánica, buena estabilidad térmica, baja adsorción, resistencia a la corrosión, alta eficiencia de separación: un nuevo tipo de fase estacionaria cromatográfica con excelente rendimiento. (4) Tamiz molecular de carbono: neutro, gran superficie, alta resistencia, larga vida de desorción, y ventajas inigualables en el análisis de trazas. (5) Carbón activado: puede usarse como fase estacionaria por sí solo. (6) Arena: se utiliza principalmente para separar metales. 14. ¿Cuáles son los soportes de uso habitual? ¿A qué categoría pertenecen? Respuesta: soporte 101: soporte de tierra de diatomeas blanca; soporte 102: soporte de tierra de diatomeas blanca; celite545: soporte de tierra de diatomeas blanca; soporte 201: soporte de tierra de diatomeas roja; soporte 6201: soporte de tierra de diatomeas roja; ladrillo aislante C-22: soporte de tierra de diatomeas roja; chromosorb: soporte de tierra de diatomeas roja.

15. ¿Por qué es necesario tratar el soporte antes de su uso? ¿Cuáles son los métodos generales de tratamiento? Respuesta: La superficie de los soportes habituales no es inerte. Tiene distintos grados de actividad catalítica y adsorción (especialmente cuando el contenido de fase estacionaria es bajo y al separar sustancias polares), lo que puede provocar cola de picos, disminución de la eficiencia de la columna y cambios en los valores de retención. Por tanto, es necesario un pretratamiento. Los métodos generales de tratamiento se describen brevemente a continuación:

1. Lavado ácido: calentar el soporte con ácido clorhídrico concentrado durante 20–30 minutos, luego enjuagar con agua del grifo hasta neutralidad, enjuagar con metanol y secar para su uso posterior. Este método elimina principalmente impurezas inorgánicas como el hierro de la superficie del soporte.

2. Lavado alcalino: remojar o reflujar el soporte en una solución de hidróxido de sodio al 10 % o de hidróxido de potasio-metanol al 5 %. Enjuagar con agua hasta neutralidad, enjuagar con metanol y secar para su uso posterior. El propósito del lavado alcalino es eliminar los centros ácidos superficiales como el óxido de aluminio, pero a menudo permanecen cantidades traza de álcali libre en la superficie, que pueden descomponer o adsorber algunas sustancias no alcalinas. Se debe tener cuidado al utilizar esta solución.

3. Silanización: los reactivos de silanización reaccionan con los grupos silanol y silil éter de la superficie del soporte para eliminar la capacidad de formación de puentes de hidrógeno superficiales, mejorando así el rendimiento del soporte. Los reactivos de silanización habituales son el dimetildiclorosilano y la hexametildisilazano.

4. Vitrificación: remojar el soporte a tratar en una solución acuosa de carbonato de sodio-carbonato de potasio (1:1) al 2–3 % durante un día. Tras el secado, calcinar a 870 °C durante 3–5 horas, luego calentar a 980 °C durante aproximadamente 40 minutos. Este tratamiento forma un esmalte vitrificado en la superficie del soporte, de ahí el nombre de «soporte vitrificado». Este soporte presenta baja capacidad de adsorción pero alta resistencia. Cuando se añade una pequeña cantidad de agente anticola a la fase estacionaria, puede analizar sustancias altamente polares como alcoholes y ácidos. Sin embargo, la eficiencia de la columna para sustancias no polares se reduce ligeramente. Además, sustancias como el metanol y el ácido fórmico muestran un cierto grado de adsorción química irreversible sobre soportes vitrificados, lo que debe considerarse durante el análisis cuantitativo.

5. Otros métodos de purificación: puede utilizarse cualquier método que emplee reacciones químicas para eliminar centros activos o recubrimiento físico para purificar las propiedades superficiales del soporte.

16. ¿Cuál es el tamaño de malla habitual del soporte? Respuesta: Para columnas cromatográficas habituales con un diámetro interior de 4–6 mm: para columnas cromatográficas más largas, el tamaño de malla del soporte es generalmente de 40–80 mesh; para columnas cromatográficas más cortas, el tamaño de malla del soporte es generalmente de 80–100 mesh (el número de orificios de tamiz por pulgada es el mesh).

17. ¿Cómo elegir un soporte habitual? Respuesta: Existen muchos soportes diferentes. Entre los soportes de tierra de diatomeas habituales: los soportes rojos (como 6201, 201) pueden usarse para separar sustancias no polares o débilmente polares. Los soportes blancos (como 101) pueden usarse para sustancias polares o alcalinas. Los soportes rojos vitrificados (como 301) pueden usarse para sustancias de polaridad media. Los soportes blancos silanizados pueden usarse para sustancias altamente polares con puentes de hidrógeno, como la determinación en aguas residuales. Para separar sustancias ácidas como los fenoles, debe usarse un soporte lavado con ácido. Para separar sustancias alcalinas como la etanolamina, debe usarse un soporte lavado con álcali. Los soportes silanizados se utilizan para el análisis de trazas. En algunos casos especiales se requieren soportes especiales, como soportes de flúor para separar isocianatos. Sin embargo, en el macromanálisis ordinario, no hay que ser demasiado exigente con el soporte; incluso el polvo de ladrillo refractario, las perlas de vidrio y la arena de mar pueden utilizarse.

18. ¿Qué es una fase estacionaria sólida? ¿En cuántas categorías puede dividirse aproximadamente? Respuesta: Se refiere a un material sólido poroso activo que se carga directamente en la columna cromatográfica como fase estacionaria. Las fases estacionarias sólidas pueden dividirse aproximadamente en tres categorías: la primera categoría son los adsorbentes, como los tamices moleculares, el gel de sílice, el carbón activado y la alúmina; la segunda categoría son los polímeros de alto peso molecular, como las microesferas porosas de alto peso molecular tipo GDX nacionales y la serie Porapak extranjera; la tercera categoría son las fases estacionarias químicamente enlazadas. En cromatografía de gases, el líquido estacionario se recubre habitualmente sobre la superficie del soporte. El uso de fases estacionarias químicamente enlazadas para analizar sustancias polares o no polares produce generalmente picos simétricos, alta eficiencia de columna y mejor estabilidad térmica de la fase estacionaria.

19. ¿Qué es una fase estacionaria? ¿Cuáles son los requisitos de una fase estacionaria? Respuesta: Generalmente es una película líquida de un compuesto orgánico de alto punto de ebullición que separa los componentes en la columna cromatográfica interactuando con las diferentes moléculas de los distintos componentes. Para una fase estacionaria utilizada en cromatografía de gases se exige generalmente lo siguiente: 1. Baja presión de vapor a la temperatura de operación, buena estabilidad térmica y ausencia de reacciones irreversibles con el analito o el gas portador; 2. Líquida a la temperatura de operación, y cuanto menor sea la viscosidad, mejor. La transferencia de masa en una fase estacionaria de alta viscosidad es lenta, lo que reduce la eficiencia de la columna. Esto determina la temperatura mínima de operación de la fase estacionaria; 3. Debe adherirse firmemente al soporte y formar una capa fina uniforme y estructuralmente estable; 4. Las sustancias a separar deben tener cierta solubilidad en la fase; de lo contrario, serán arrastradas rápidamente por el gas portador y no podrán repartirse entre las dos fases; 5. Debe ser capaz de separar sustancias con puntos de ebullición similares pero de tipos diferentes, es decir, retiene más una clase de compuesto que otra. Esta capacidad de separación se conoce como selectividad de la fase estacionaria.

20. ¿Cuáles son los principios para seleccionar una fase estacionaria? Respuesta: Basándose en las interacciones entre los componentes a separar y las moléculas de la fase estacionaria, la selección de una fase estacionaria se basa generalmente en el llamado «principio de similitud». Esto se refiere a las similitudes entre las propiedades de la fase estacionaria y los componentes a separar, como grupos funcionales, enlaces químicos, polaridad y determinadas propiedades químicas. Cuando las propiedades son similares, la interacción entre las dos moléculas es más fuerte, la solubilidad de los componentes a separar en la fase estacionaria es mayor, el coeficiente de reparto es mayor y, por tanto, el tiempo de retención es más largo. Por el contrario, cuando la solubilidad es menor y el coeficiente de reparto es más pequeño, los componentes eluirán rápidamente de la columna. A continuación se tratan diferentes casos: a. Separar compuestos polares utilizando una fase estacionaria polar. En este caso, las interacciones entre los componentes de la muestra y las moléculas de la fase estacionaria son principalmente de orientación e inducción. Los picos de los componentes eluyen en orden de polaridad, eluyendo primero los componentes menos polares y más tarde los más polares. b. Separar compuestos no polares utilizando una fase estacionaria no polar. Las interacciones entre los componentes de la muestra y las moléculas de la fase estacionaria son fuerzas de dispersión, sin selectividad particular. En este caso, los componentes eluyen en orden de punto de ebullición, apareciendo primero el pico del de menor punto de ebullición. La eficiencia de separación de isómeros con puntos de ebullición similares es muy baja. c. Al separar mezclas de compuestos no polares y polares, puede utilizarse una fase estacionaria polar. En este caso, el componente no polar eluye primero. Cuanto más polar sea la fase estacionaria, más fácil fluye el componente no polar. d. Para muestras que pueden formar puentes de hidrógeno, como alcoholes, fenoles, aminas y ag... [truncado]

21. ¿Cuántos métodos existen para tratar fases estacionarias mixtas? Respuesta: Existen tres métodos para tratar fases estacionarias mixtas: 1. Aplicar cada una al soporte por separado y luego mezclar; 2. Mezclar las fases estacionarias antes de aplicar, asegurando que todas las fases estacionarias utilizadas estén disueltas en el mismo disolvente; 3. Aplicar cada fase por separado, luego cargar cada fase en una columna cromatográfica de longitud proporcional, y conectarlas en serie. Los resultados de estos tres métodos son generalmente los mismos, pero pueden diferir para separaciones específicas.

22. ¿Cuál es la cantidad adecuada de líquido estacionario aplicado? Respuesta: Dado que el contenido de líquido estacionario afecta significativamente la eficiencia de separación, la proporción mínima en peso del líquido estacionario respecto al soporte es del 5 %, utilizándose generalmente el 15–25 %. Una proporción de líquido más alta hará que la muestra analizada se difunda a través de la película líquida más gruesa, perjudicando la separación. Si la proporción de líquido es demasiado baja, la película líquida más fina hará que la adsorción residual de la superficie del soporte se transparente, provocando cola de los picos cromatográficos. Dado que una proporción baja de líquido favorece el equilibrio, puede utilizarse un caudal de gas portador más alto. Por tanto, el uso de una proporción baja de líquido y una pequeña cantidad de muestra puede acortar el tiempo de análisis. Para soportes de tierra de diatomeas, el contenido de líquido estacionario puede ser de hasta el 15–30 %. Debido a la menor superficie de los soportes de flúor, el máximo permitido es el 10 %. Para las microesferas de vidrio, debido a su superficie extremadamente pequeña, el contenido de líquido estacionario solo puede mantenerse en torno al 0–25 %.

23. ¿Cuáles son los disolventes de fase estacionaria habituales para la preparación de columnas? ¿Cuáles son los principios para seleccionar disolventes? Respuesta: Los disolventes habituales son metanol, etanol, éter, acetona, n-butanol, n-hexano, éter de petróleo, benceno, tolueno y cloroformo. Los principios de selección son: 1. Buena solubilidad, 2. Ausencia de reacción química con la fase estacionaria, 3. Bajo punto de ebullición y 4. Baja toxicidad.

24. ¿Cuál es el método convencional para recubrir un soporte con una fase estacionaria al preparar una columna? Respuesta: Para la mayoría de las columnas cromatográficas habituales, se utiliza el método de recubrimiento «convencional». El procedimiento sencillo es: tomar la cantidad necesaria de fase estacionaria, disolverla en una cantidad adecuada de disolvente (suficiente para empapar el soporte), verter lentamente el soporte en la solución, agitando a medida que se añade, y luego irradiar con una lámpara de infrarrojos (o evaporar en un baño de agua) para expulsar el disolvente. La fase estacionaria se adherirá entonces al soporte.

25. ¿Cuáles son los métodos habituales para llenar columnas cromatográficas? Respuesta: La calidad del llenado con fase estacionaria afecta directamente a la eficiencia de la columna. Habitualmente se utiliza el llenado por bombeo. Esto consiste en taponar un extremo de la columna con lana de vidrio, conectarla a una bomba de vacío y acoplar un embudo al otro extremo. La fase estacionaria se añade bajo vacío, golpeando la columna durante el llenado hasta que no entre más fase estacionaria. Una vez llenada, la columna se tapona con lana de vidrio. El empaquetamiento de la columna requiere un empaquetado uniforme y compacto, sin huecos.

26. ¿Por qué las columnas cromatográficas recién instaladas necesitan envejecer durante un tiempo antes de su uso? Respuesta: Tras conectar una columna cromatográfica recién instalada al instrumento, primero debe someterse a una prueba de presión y estanqueidad, y luego purgarse con gas portador a temperatura constante durante varias horas antes de ser utilizada para análisis. Esto se denomina generalmente proceso de envejecimiento de la columna. El propósito del envejecimiento es eliminar disolventes residuales, impurezas de bajo punto de ebullición y fases estacionarias de bajo peso molecular, enderezando así la línea base del registrador. La temperatura de envejecimiento también permite que la fase estacionaria se redistribuya sobre la superficie del soporte, logrando un recubrimiento más uniforme y seguro. Tras un periodo de envejecimiento, la eficiencia y el rendimiento de la columna cromatográfica instalada se han estabilizado antes de su uso.

27. ¿Cuáles son los síntomas de una columna cromatográfica averiada? ¿Cuál es la causa de su fallo? Respuesta: Las principales manifestaciones del fallo de una columna cromatográfica son una mala separación cromatográfica y tiempos de retención de los componentes significativamente acortados. Las principales razones del fallo de una columna cromatográfica son: en cromatografía gas-sólido, la reducción de la actividad o las propiedades de adsorción de la fase estacionaria; en cromatografía gas-líquido, la pérdida gradual del líquido estacionario durante el uso. 28. Envejecimiento de columnas capilares : El propósito del envejecimiento: la fase estacionaria de una columna de cromatografía de gases suele distribuirse en forma de recubrimiento en el interior de la pared del tubo de la columna (columna capilar) o sobre la superficie del soporte (columna empaquetada). En una columna de cromatografía de gases nueva, la fase estacionaria exterior suele estar débilmente unida al soporte. Cuando se utiliza a altas temperaturas, se perderá lentamente, provocando fluctuaciones de la línea base y aumento del ruido. Para evitar este fenómeno, puede precalentarse a una temperatura más alta (generalmente la temperatura de tolerancia de la columna) durante un tiempo para evaporar la fase estacionaria débilmente unida, evitando así interferencias en análisis posteriores. Además, pueden realizarse operaciones de envejecimiento en columnas de cromatografía de gases que se han utilizado durante mucho tiempo para eliminar contaminantes residuales en la columna.

Elevar la temperatura de la columna a una temperatura constante, normalmente su límite superior de temperatura. En circunstancias especiales, la temperatura puede elevarse aproximadamente 10–20 °C por encima de la temperatura de operación. Sin embargo, el límite de temperatura de la columna no debe superarse, ya que esto puede dañar la columna. Evite también ajustar la rampa de temperatura demasiado lenta. Una vez alcanzada la temperatura de envejecimiento, registre y observe la línea base. Amplíe la línea base para facilitar la observación. Inicialmente, la línea base debe seguir subiendo, luego comenzar a bajar 5–10 minutos después de alcanzar la temperatura de envejecimiento, continuando durante 30–90 minutos. Una vez que alcanza un valor fijo, la línea base se estabiliza. Si la línea base permanece estable después de 2–3 horas o no muestra una tendencia descendente clara después de 15–20 minutos, podría haber una fuga o contaminación en el sistema. En tales casos, reduzca inmediatamente la temperatura de la columna por debajo de 40 °C, inspeccione el sistema y aborde cualquier problema lo antes posible. Continuar el envejecimiento no solo dañaría la columna, sino que también impediría alcanzar una línea base estable. Además, el tiempo de envejecimiento debe ser limitado, ya que esto acortaría la vida útil de la columna. En general, las columnas con fases estacionarias polares y recubrimientos más gruesos requieren tiempos de acondicionamiento más largos, mientras que las columnas con fases estacionarias menos polares y recubrimientos más finos requieren tiempos de acondicionamiento más cortos. Los métodos de acondicionamiento para columnas PLOT varían; consulte las instrucciones de operación de la columna para conocer los pasos específicos. Si el acondicionamiento se realiza antes de conectar la columna a un detector, el extremo distal de la columna puede dañarse. Es importante cortar los últimos 10–20 cm de la columna antes de conectarla al detector. El límite de temperatura es el rango de temperatura dentro del cual la columna puede operar normalmente. Operar por debajo del límite inferior de temperatura producirá una separación y forma de pico subóptimas, pero esto no daña la columna en sí. La temperatura superior... [truncado]

29. Resolución de la deriva de la línea base: La deriva de la línea base suele producirse cuando se utiliza temperatura programada en un GC. Este fenómeno suele estar causado por lo siguiente: sangrado de la columna, sangrado de la junta de inyección, contaminación del inyector o del detector, y cambios en el caudal de gas. Si se utiliza un detector de alta sensibilidad, incluso un ligero sangrado de la columna o contaminación del sistema puede provocar una deriva significativa de la línea base. Para mejorar la fiabilidad del análisis cualitativo y cuantitativo, la deriva de la línea base debe minimizarse o eliminarse en la medida de lo posible. Para determinar el origen de la deriva de la línea base: primero, retire la columna del cromatógrafo, bloquee la entrada del detector y observe la deriva de la línea base durante el aumento programado de temperatura. Si la línea base es inestable, la contaminación proviene del detector (para soluciones, consulte «Cómo reducir la contaminación del detector»); si la línea base es estable, demuestra que el detector está en buen estado. En ese momento, utilice un trozo corto de tubo de cuarzo fundido para conectar el inyector y el detector, realice un programa de rampa de temperatura y observe la deriva de la línea base. Esto refleja la contaminación del inyector. Si la línea base es inestable, puede determinarse que el problema proviene de la puerta de inyección (para soluciones, consulte «Cómo reducir la contaminación del inyector»); si la línea base es estable, demuestra que ni el detector ni la puerta de inyección están contaminados. En ese momento, reinstale la columna y realice el mismo programa de rampa de temperatura para determinar si la deriva de la línea base está causada por la pérdida de la columna.

30. ¿Cómo reducir la deriva de la línea base causada por muestras e inyectores? Si quedan sustancias no volátiles de alto peso molecular en la columna cromatográfica, es probable que se produzca deriva de la línea base durante el aumento programado de temperatura. Esto se debe a que estas sustancias están fuertemente retenidas y se mueven lentamente por la columna. Puede utilizar el método de re-envejecimiento para expulsar estos componentes fuertemente retenidos de la columna, pero este método aumenta la posibilidad de oxidación del líquido estacionario. Además, también puede utilizar disolvente para lavar la columna cromatográfica (lea las precauciones de uso de la columna antes del lavado para seleccionar un disolvente adecuado); también puede instalar una columna de guarda para evitar problemas desde el principio. Si la deriva de la línea base está causada por la contaminación del inyector, puede resolverse sustituyendo la junta de inyección, el liner y el anillo de sellado, y lavando la puerta de inyección con disolvente. Tras el mantenimiento, utilice un trozo de tubo de cuarzo fundido para conectar el inyector y el detector, e inyecte una muestra ciega para confirmar que el inyector está limpio.

31. ¿Cómo puedo reducir la deriva de la línea base del detector? La deriva de la línea base del detector suele estar causada por pequeñas cantidades de hidrocarburos en el gas auxiliar o el gas combustible. El uso de un purificador de gases de alta pureza para tratar el gas auxiliar o el gas combustible puede reducir esta deriva de la línea base. El uso de un generador de gases de alta pureza puede mejorar la estabilidad de la línea base del FID. Un mantenimiento adecuado del detector, incluida la limpieza periódica, también puede reducir esta deriva.

32. ¿Cómo puedo reducir la deriva de la línea base causada por el sangrado de la columna? Antes de usar una columna nueva, acondiciónela de la siguiente manera para minimizar el sangrado de la columna: acondiciónela a una temperatura 20 °C por encima de la temperatura de operación experimental o a la temperatura de operación de la columna (el valor que sea menor). Un envejecimiento más largo a menor temperatura es más eficaz que uno más corto a mayor temperatura. Si el gas portador contiene pequeñas cantidades de oxígeno o humedad, o si hay fugas en la línea de gas, la fase estacionaria puede oxidarse fácilmente a altas temperaturas, provocando sangrado de la columna y deriva de la línea base. Una vez que la fase estacionaria se oxida, debe acondicionarse durante varias horas con gas portador de alta pureza para nivelar la línea base. Este daño a la fase estacionaria es irreversible; si sigue pasando oxígeno por la columna, la línea base no se nivelará ni siquiera tras el envejecimiento. Por tanto, durante los experimentos, utilice un filtro de oxígeno/humedad de alta calidad en la línea de gas y realice una detección de fugas rigurosa con un detector de fugas electrónico de alta calidad.

33. Sin pico 1. La llama del detector FID se ha extinguido 2. El grado de vaporización del inyector es demasiado bajo y la muestra no puede vaporizarse 3. La temperatura de la columna es demasiado baja, provocando que la muestra se condense en la columna cromatográfica 4. La puerta de inyección tiene fugas 5. La entrada de la columna tiene fugas o está bloqueada 6. Hay un problema con la aguja de inyección y la muestra no puede aspirarse.

34. Todos los picos de los componentes son pequeños o se hacen más pequeños. Causas posibles y medidas recomendadas: 1. Aguja de inyección defectuosa. Utilice una aguja nueva. 2. Fugas tras la inyección. Determine el punto de fuga. 3. La relación de división es demasiado grande. 4. El peso molecular del analito es demasiado grande. Aumente la temperatura de la puerta de inyección. 5. El NPD está cubierto de contaminantes (sílice). Sustituya la perla. 6. La temperatura del NPD es demasiado alta (temperatura de operación o ambiente). El gas es impuro. Sustituya la perla. Evite la operación a alta temperatura. 7. El detector no es compatible con la muestra.

35. Ensanchamiento de picos 1. El ensanchamiento de picos suele estar causado por sobrecarga de la columna. Reduzca el volumen de inyección y utilice una columna de mayor capacidad. 2. Aumente la temperatura del HORNO y del INY. 3. Aumente el caudal de gas portador. 4. Domine la técnica de inyección. 5. La muestra anterior se aglomeró en la columna y no se evacuó completamente a tiempo. 6. La muestra reaccionó con el soporte de la fase estacionaria.

36. La altura y el área de pico no son repetibles 1. La inyección no es repetible, con gran desviación 2. Desplazamiento de picos causado por otros cambios en la forma de los picos 3. Interferencia de la línea base 4. Cambios en los ajustes de parámetros del sistema del instrumento, estandarización de parámetros y normalización 5. Cambios en el rendimiento de la columna cromatográfica

37. Mala repetibilidad de la sensibilidad durante la inyección continua. En condiciones de inyección continua, el área de pico fluctúa y la precisión de la medición es baja. Las razones son las siguientes: 1. Mala técnica de inyección 2. Fugas de gas portador o caudal inestable 3. Contaminación del detector 4. Contaminación de la columna o del liner. Limpie el liner y la columna con disolvente (metanol de alto grado); sustitúyalos (si es necesario) 5. Fugas en la jeringa 6. El volumen de inyección supera el rango lineal del detector, provocando sobrecarga del detector.

38. Cola de picos 1. El liner o la columna están contaminados o mal instalados. Existe volumen muerto. Si aparece cola al inyectar metano, reinstale. 2. La temperatura del inyector es demasiado alta. 3. La cabeza de la columna es irregular. Córtela con diamante. 4. La polaridad de la fase estacionaria no coincide con la muestra. Sustituya la columna por una adecuada. 5. Hay un punto frío en el camino de flujo de la muestra. Elimine la zona de baja temperatura del recorrido. 6. Hay residuos de corte acumulados en el liner o la columna. Limpie y sustituya el liner. Corte 10 cm de la cabeza de la columna. 7. El tiempo de inyección es demasiado largo. 8. La relación de división es baja. Aumente la relación de división (al menos superior a 20/1). 9. El volumen de inyección es demasiado alto. Reduzca el volumen de inyección o diluya la muestra.

39. Separación reducida 1. Contaminación de la columna 2. Daño en la fase estacionaria (sangrado de la columna) 3. Fallo de inyección Comprobar fugas 4. Comprobar la adaptabilidad de temperatura y el liner 5. La concentración de la muestra es demasiado alta, diluya, reduzca el volumen de inyección, utilice una relación de división alta

40. Ensanchamiento del pico del disolvente 1. Fallo de instalación de la columna 2. Fugas de inyección 3. Volumen de inyección alto Aumente la temperatura de vaporización 4. Relación de división baja Aumente la relación de división 5. Temperatura de columna baja 6. HORNO inicial demasiado alto en inyección con división Baje la temperatura inicial de la columna y utilice un disolvente de alto punto de ebullición 7. Tiempo de purga demasiado largo (inyección sin división) Defina un procedimiento de purga corto

41. La línea base deriva hacia abajo 1. Una columna recién instalada tiene una línea base que sigue derivando hacia arriba durante varios minutos. Continúe el envejecimiento. 2. El detector no ha alcanzado el equilibrio. Prolongue el tiempo de equilibrio del detector. 3. Se han liberado depósitos del detector u otras partes del sistema GC. Límpielos.

42. La línea base deriva hacia arriba 1. La fase estacionaria de la columna cromatográfica está dañada 2. El caudal de gas portador disminuye, ajuste la presión del gas portador

43. Ruido 1. La columna capilar está insertada demasiado profunda en el detector. Reinstale la columna. 2. El ruido de la línea base está causado por fugas de gas al utilizar ECD o TCD. Compruebe y repare la línea de gas. 3. Caudal de gas o selección de gas inadecuados para FID, NPD o FPD. Ajuste el caudal de gas de alta pureza. 4. La entrada está contaminada. Limpie la entrada, sustituya la junta y sustituya la fibra de vidrio del liner. 5. La columna capilar está contaminada. Corte 10 cm del primer extremo, limpie la columna con disolvente y sustitúyala. 6. El detector funciona mal.

44. Varios métodos para mejorar la separación: 1. Aumentar la longitud de la columna puede mejorar la separación. 2. Reducir el volumen de inyección (aumentando el volumen de disolvente para muestras sólidas). 3. Mejorar la técnica de inyección para evitar inyecciones dobles. 4. Reducir el caudal de gas portador. 5. Bajar la temperatura de la columna. 6. Aumentar la temperatura del vaporizador. 7. Reducir el volumen muerto del sistema, por ejemplo, asegurando que las conexiones de la columna estén completamente insertadas y utilizando un vaporizador sin división para inyección sin división. 8. La división de columnas capilares y la selección de una relación de división adecuada son esenciales. En resumen, esto debe explorarse experimentalmente según las circunstancias específicas. Por ejemplo, reducir el caudal de gas portador o la temperatura de la columna puede ensanchar los picos cromatográficos, por lo que el ajuste de las condiciones debe adaptarse a la forma del pico. El objetivo final es lograr una buena separación y una elución rápida de los picos.

45. ¿Cómo puedo determinar si una columna está completamente envejecida? El detector FID es el más adecuado para monitorizar la línea base durante el envejecimiento de la columna. Al final de la rampa de temperatura, la línea base aumentará, luego disminuirá gradualmente y se nivelará, momento en el cual la columna se considera completamente envejecida. Cuando la columna se expone a altas temperaturas, la vida útil de la columna disminuye drásticamente. Si un sangrado significativo de la columna persiste durante más de dos horas durante el envejecimiento, enfríe la columna a temperatura ambiente e identifique las fuentes del sangrado, como infiltración de oxígeno, fugas de la junta y residuos del instrumento. Sangrado de la columna: tras envejecer la columna, realice una prueba de sangrado. Ejecute una rampa de temperatura sin inyectar muestra, comenzando a 50 °C y aumentando la temperatura a 10 °C/min hasta la temperatura máxima de operación de la columna. Mantenga la temperatura máxima durante 10 minutos. El cromatograma resultante es el gráfico de sangrado de la columna. Compare este gráfico con futuras inyecciones ciegas. Si se generan numerosos picos durante la inyección ciega, el rendimiento de la columna ha cambiado. Esto podría deberse a oxígeno en el gas portador o arrastre de muestra. Si dispone de un GC-MS, el sangrado iónico típico de una columna de baja polaridad (p. ej., DB/HP-1 o 5) tendrá relaciones masa/carga de m/z 207, 73, 281, 355, etc. La mayoría son ciclosiloxanos. El sangrado de la columna se considera generalmente causante de ruido y de una línea base inestable. El verdadero sangrado de la columna suele manifestarse como una deriva positiva que se asemeja al ruido. Compruebe si hay una deriva ascendente significativa de la línea base y la elución de picos en el blanco.

46. Análisis de las causas de extinción o fallo de encendido de la llama del detector de ionización de llama (FID): ① Condensación. Dado que se forma agua durante el proceso de combustión del FID, la temperatura del detector debe mantenerse por encima de 100 °C para evitar la condensación. Si el detector no ha estado encendido durante un periodo prolongado, se requiere un largo periodo de horneado antes del encendido. ② El caudal de la columna es demasiado alto. Si debe utilizarse una columna de gran diámetro interior, reduzca el caudal de gas portador el tiempo suficiente para permitir que el FID se encienda. ③ Compruebe que el tipo de boquilla instalado es adecuado para la columna utilizada y compruebe si hay obstrucción de la boquilla.

47. Cilindros de gas y su uso

1. Los cilindros de gas son recipientes de alta presión para almacenar gas comprimido. Su capacidad es generalmente de 40 a 60 L, con una presión máxima de trabajo de 15 MPa (150 atm) y un mínimo de más de 0,6 MPa (6 atm). Los cilindros de gas de alta presión estándar se fabrican de acuerdo con las normas nacionales y deben llevar las siguientes marcas en el hombro del cilindro: fabricante, fecha de fabricación, modelo y número de cilindro, peso del cilindro, volumen de gas, presión de trabajo, presión de prueba hidrostática, fecha de prueba hidrostática y próxima fecha de inspección.

Dado que los cilindros de gas contienen altas presiones y algunos gases son tóxicos, inflamables o explosivos, para garantizar la seguridad y evitar confusiones entre los distintos cilindros, deben pintarse de un color específico e indicar claramente el nombre del gas que contienen. Consulte la Tabla 1-3 para las marcas de los distintos cilindros de gas.

Tabla 1-3 Marcas de los distintos cilindros de gas

Tipo de gas	Color de la botella	Color de la marca	Tipografía	Color de la banda
Nitrógeno	negro	amarillo	Nitrógeno (N₂)	marrón
oxígeno	azul celeste	negro	Oxígeno (O₂)
hidrógeno	verde oscuro	rojo	Hidrógeno (H₂)	rojo
aire comprimido	negro	blanco	Aire comprimido
acetileno	blanco	rojo	Acetileno (C₂H₂)	verde
argón crudo	negro	blanco	Argón crudo	blanco
argón puro	gris	verde	Argón puro

2. Precauciones para el uso de cilindros de acero (1) Los cilindros de acero deben enviarse periódicamente a los departamentos pertinentes para su inspección. Solo los que superen la inspección pueden llenarse. Los cilindros de acero llenados con gases generales deben inspeccionarse una vez cada tres años, y los cilindros de acero llenados con gases corrosivos una vez cada dos años. (2) Al transportar cilindros de acero, coloque la tapa del cilindro y las bandas elásticas superior e inferior, y manipúlelos con cuidado. No los ruede, golpee, deje caer ni vibre violentamente contra el suelo para evitar explosiones. Al colocar y utilizar cilindros de acero, deben fijarse con un soporte o alambre. (3) Los cilindros de acero deben almacenarse en un lugar fresco y seco, lejos de fuentes de calor, con buena ventilación, y evitar llamas abiertas y la luz solar. Cuando el cilindro se calienta, el gas se expande y la presión interior del cilindro aumenta, lo que puede provocar fácilmente fugas o incluso explosiones. Los cilindros de gas combustible y los de oxígeno deben almacenarse en habitaciones separadas. Los cilindros de hidrógeno se colocan mejor en una pequeña habitación dedicada fuera del edificio para garantizar la seguridad. (4) Al utilizar cilindros de acero, excepto para dióxido de carbono y amoniaco, generalmente se requieren válvulas reductoras de presión. Entre las distintas válvulas reductoras de presión, excepto las de nitrógeno y oxígeno que pueden usarse indistintamente, las demás solo pueden usarse para gases específicos para evitar explosiones. Al instalar la válvula reductora, debe enroscarse con cuidado, normalmente 7 vueltas de rosca (conocidas comúnmente como 7 hilos). Los gases propensos a la polimerización (como el acetileno y el etileno) deben tener un periodo de almacenamiento determinado para evitar el almacenamiento a largo plazo. (5) Para gases inflamables como el hidrógeno y el acetileno, la válvula del cilindro es de «rosca inversa» (rosca izquierda), es decir, se aprieta en sentido antihorario; para gases no inflamables o comburentes como el oxígeno y el nitrógeno, la válvula del cilind... [truncado]

Mantenimiento preventivo del GC y acciones correctoras: Siempre que un sistema cromatográfico se contamine con sustancias de alto punto de ebullición, particularmente en la entrada, puede esperarse un deterioro del rendimiento cromatográfico. Los analistas deben realizar un mantenimiento rutinario del instrumento, incluida la sustitución periódica de las juntas, la limpieza y el acondicionamiento del liner de entrada y, si es necesario, el corte de 0,5 a 1 μm de la columna capilar desde la entrada. Si persisten el deterioro del rendimiento cromatográfico y los picos fantasma, puede ser necesaria la limpieza de las superficies metálicas de la entrada. Las columnas capilares son fiables y fáciles de usar, pero para garantizar un buen rendimiento de separación, algunos procedimientos específicos requieren atención:

(1) El contacto entre la columna capilar y la pared del horno cromatográfico puede afectar al rendimiento cromatográfico y a la vida útil de la columna;

(2) Debe tenerse cuidado para evitar que entre oxígeno en la columna capilar;

(3) La junta de inyección solo puede sustituirse después de que el horno cromatográfico se haya enfriado;

(4) Antes de recalentar el horno cromatográfico, la columna cromatográfica debe purgarse con gas portador durante 15 min;

(5) Debe utilizarse un tubo de desoxidación para eliminar el oxígeno traza del gas portador, y el tubo de desoxidación debe sustituirse periódicamente;

(6) Independientemente de si el horno cromatográfico está calentando o no, debe fluir gas portador a través de la columna cromatográfica.

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